A．基因多态性与RSA的关联分析

首先，本研究选择了自身免疫性相关基因KIAA0319L、PXK、JAZF1的代表性SNP位点，对84对URSA患者夫妇、102对正常生育夫妇的外周血DNA进行了上述基因SNP位点筛查，发现两组间PXK- rs2176082位点的基因型频率有统计学差异，提示PXK- rs2176082多态性可能与RSA遗传易感性相关联。

其次，根据2015年Science的报道：有丝分裂非整倍体与母亲基因组4号染色体上的一个单核苷酸变异（SNP rs2305957)相关。本研究首先分析了2015例不孕症女性患者的rs2305957基因型与IVF囊胚形成率的关系，发现携带高危基因型AA的患者囊胚形成率显著降低 （AA vs AG vs GG，30.52±1.25 vs 36.58±0.88 vs 41.62±1.17，P<0 snp="" or="1.29," ci="1.10-1.53," p="0.003）有统计学差异，提示rs2305957可能是ERSA的易感位点。</p" vs="" ag="">

B. DNA基因拷贝数变异与RSA的关联分析

本研究利用Array-CGH技术检测了50对URSA夫妇和38对正常生育夫妇的外周血DNA基因拷贝数变异，发现URSA男性患者携带的CNVs累计片段长度显著增加；URSA男性患者携带位于Xp22.33区域的CNVs的比例高于对照组，该区域涉及的PPP2R3B，SHOX基因参与胚胎发育。

C. WNT6基因在ERSA患者中的突变筛查及相关功能研究

本研究首先利用Sanger sequencing技术对200对ERSA患者夫妇及200对正常生育夫妇的WNT6基因的全部外显子进行突变筛查, 首次发现了WNT6基因错义突变（c.443T>G），提示了WNT6基因突变与RSA的相关性。通过后续体外功能试验，利用野生型和突变型WNT6慢病毒载体转染人永生化子宫内膜基质细胞（HESCs），检测了Wnt信号通路下游的关键细胞周期调控因子（CCNA1、CCNA2、CCNB1、CCND1、CCND3、CCNE1 、CDK2、CDC6、CDC20）的mRNA水平，未发现该错义突变影响这些因子mRNA水平的表达，提示WNT6 c.443T>G可能不是UERM患者的致病性突变位点。

D. miR-19b, miR-494参与调控抑癌基因PTEN在早期胚胎发育中的作用

本研究首先检测自然流产和计划外妊娠流产的绒毛组织中抑癌基因PTEN mRNA及蛋白的表达，发现PTEN在自然流产绒毛组织中的表达均显著高于对照组；但自然流产的正常核型和异常核型的绒毛组织间，PTEN表达无显著性差异。进一步检测自然流产和计划外妊娠流产的绒毛组织中PTEN相关miRNA的表达，发现miR-19b 在自然流产绒毛组织中的表达显著下降, miR-494, miR-146a和miR-21的表达显著增高。过表达JEG-3细胞系（绒毛膜癌细胞系）中的miR-19b，PTEN蛋白表达下调；过表达miR-494，PTEN蛋白表达上调。

E. miR-300, miR-661调控抑癌基因P53在早期胚胎发育中的作用

本研究首先检测自然流产和计划外妊娠流产的绒毛组织中抑癌基因P53、癌基因MDM2 mRNA及蛋白的表达，自然流产患者P53 mRNA及蛋白表达增高，MDM2 mRNA及蛋白表达降低。进一步检测自然流产和计划外妊娠流产的绒毛组织中P53相关miRNA的表达，发现miR-29b, miR-125b, miR-202, miR-214, miR-375, miR-504, miR-661, miR-141在自然流产绒毛组织中的表达显著增高, miR-300的表达显著下降。分别过表达JEG-3细胞系（绒毛膜癌细胞系）中的miR-300、miR-661,发现miR-300下调P53蛋白表达；miR-661上调P53蛋白表达，下调MDM2蛋白表达。

F. miRNA-29a/b/c在胎盘植入中的功能研究

本研究首先检测同一患者胎盘植入部分和非植入部分miR-29a/b/c、MCL1基因（抗凋亡基因）的表达，发现植入部分胎盘组织中miR-29a/b/c表达明显降低，MCL1基因表达显著增高。Luciferase 和 western blot实验证实 miR-29a/b/c通过与MCL1的 3’UTR区域结合， 降调MCL1基因。免疫组化显示胎盘植入部分中间型滋养细胞数量明显增加，且中间型滋养细胞MCL1染色阳性。过表达HTR-8/SVneo细胞中miR-29a/b/c后，细胞凋亡率升高，提示低表达的microRNA-29a/b/c可能通过调控靶基因MCL1抑制中间型滋养细胞凋亡，从而导致胎盘植入中中间型滋养细胞数量增加。

G. 端粒长度与RSA的相关分析

本研究共检测78对URSA夫妇和57对正常生育夫妇外周血样本，发现URSA女性和男性患者的端粒长度均显著低于正常对照，提示端粒长度缩短可能是URSA的潜在致病因素之一。

H. 低深度全基因组测序技术在RSA的应用

目前，本研究已完成1077例URSA夫妇外周血样本检测，低深度全基因组测序技术检测出75例相互易位（6.96%），高分辨率G显带技术发现59例相互易位、7例罗氏易位（6.13%），联合两种技术共发现88例染色体易位（8.17%）；此外，还发现9例显微结构的倒位(3.6Mb to 30.1Mb)和18例亚显微结构的倒位(512.5kb to 2.7Mb) (2.7%, 95% CI, 1.7 to 3.7)。低深度全基因组测序技术检测出6例致病性基因拷贝数变异（4例缺失，2例重复），为URSA的遗传学病因研究提供了新的证据。